Thermo Pierce 89983，SILAC Protein Quantitation Kit

Thermo Pierce 89983，SILAC Protein Quantitation Kit–DMEM

產品名稱：SILAC蛋白定量試劑盒

品牌：Thermo Pierce

貨號：89983

組分：貨號：1860972 （SILAC Protein Quantitation Kit） +貨號：89986( Dialyzed FBS for SILAC,50ML )

儲存溫度：1860972 4°C，89986 -20°C

SILAC蛋白定量試劑盒及試劑 用途介紹：

對于差異蛋白表達進行定量分析。

在細胞培養中使用氨基酸進行穩定的同位素標記（SILAC）是鑒定和定量復雜蛋白樣品中相關差異的變化的一種有效的方法。SILAC方法通過體內代謝將“重的"13C-或15N標記的氨基酸整合到蛋白中然后進行質譜（MS）分析以便加快對蛋白的測定、鑒定、定量和理解。

應用：

?  可以使用專門針對干細胞的試劑盒對干細胞分化中的蛋白進行鑒定。

?  可以對不同細胞處理后的蛋白豐度的相關變化進行定量的分析。

?  可以對沒有抗體的蛋白進行定量分析。

?  正常細胞vs.疾病細胞的蛋白表達譜的繪制。

?  可以在一個實驗中對成千上萬的蛋白進行鑒定和定量。

 產品特點：

標記物能夠100%的整合到活細胞的蛋白中。

? 可重復 – 降低由于樣品制備不同而造成的實驗內差異。

? 靈活 – 培養基中缺乏L-賴氨酸和L-精氨酸兩種氨基酸，因此可以通過兩種氨基酸的同位素標記更加*的覆蓋整個蛋白質組。

? 通用 – 可以對多種在DMEM或RPMI 1640培養基中能夠培養的哺乳動物細胞中表達的蛋白進行標記，這些細胞包括HeLa，293T，COS7，U2OS，A549，A431，HepG2，NIH 3T3，Jurkat及其它。

? 兼容– 可以通過分化培養基測定人間質干細胞或小鼠胚胎干細胞中調節發育的重要蛋白。

 SILAC需要在含有輕或重的必需氨基酸的培養基中培養哺乳動物細胞；例如，分別含有12C6及13C6 L-賴氨酸。常規的實驗包括在含有輕氨基酸（對照）的培養基中培養一批細胞，同時在含有重氨基酸（實驗組）的培養基中培養相同的另一批細胞。輕、重氨基酸通過自然的細胞內蛋白合成的過程整合到蛋白中。在對一個樣品進行化學處理或者遺傳操作使其蛋白質組發生變化之后，將從兩種細胞中得到的蛋白等量的混合在一起，然后利用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳進行分離并利用胰酶進行消化然后進行MS分析。由于標記有重和輕氨基酸的多肽在化學性質上是*相同的，因此這兩種多肽在反相柱洗脫時是同時洗脫的，因此能夠在MS分析中同時檢測到兩種多肽。然后就可以利用來自于每種蛋白的同位素標記的多肽的相

對峰強度來確定處理后的樣品的蛋白豐度的變化。（見下圖）我們提供幾種不同的Thermo Scientific Pierce SILAC試劑盒，還提供能夠支持不同類型的哺乳動物細胞系生長的培養基，這些細胞系甚至包括人間質干細胞和小鼠胚胎干細胞。每個試劑盒都包括同位素標記細胞所需的所有試劑，這些試劑包括培養基、重和輕氨基酸對以及透析過的血清。幾種同位素標記的賴氨酸和精氨酸都是單獨提供的，因此可以進行多重實驗和分析。當與Thermo Scientific蛋白/多肽樣品富集產品結合使用時，可以使用Pierce SILAC蛋白定量試劑盒對低豐度蛋白進行MS分析，這些低豐度蛋白包括細胞表面蛋白、細胞器特異性蛋白以及磷酸化蛋白或糖蛋白這些經過翻譯后修飾的蛋白。

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