Percoll 細胞分離液

Percoll 細胞分離液

（一）　原理

Percoll是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。滲透壓很低（<20mosm／kg H２O）, 粘度也很小，可形成高達1.3g／ml密度，采用預先形成的密度梯度時可在低離心力（200～1000g）于數(shù)分至數(shù)十分鐘內(nèi)達到滿意的細胞分離結果。由 于Percoll擴散常數(shù)低，所形成的梯度十分穩(wěn)定。此外，Percoll不穿透生物膜，對細胞無毒害，因此廣泛用于分離細胞、亞細胞成分、細菌及病毒， 還可將受損細胞及其碎片與完好的活細胞分離。

（二）操作方法及注意事項

1.不同濃度（密度）Percoll溶液的制備: 先用9份Percoll與1份8.5％ NaCl或1.5MPBS混合達到生理性滲透壓，然后用生理溶液（0.85％ NaCl或0.15M PBS）稀釋到所需濃度。

Percoll濃度（％）　　70　　　　60　　　　50　　　　40　　　　30　　　　　20

比重g／ml　　　1.090         1.077         1.067          1.056            1.043               1.031

2. 　不連續(xù)密度梯度Percoll層的制備: 先將試管壁用牛血清濕潤，除去多余血清，這種預處理可使逐層疊加的Percoll液平穩(wěn)沿管壁流下，使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長針頭注射器從 高密度向低密度逐層放置，有時相鄰兩層Percoll比重相差不大時，可將Percoll液放入注射器中，小針頭斜面緊貼管壁，任其自然慢慢流下。

3.　裝樣：樣品體積和細胞濃度根據(jù)不同細胞而異，一般加樣體積不宜過大，細胞濃度也不可過高，否則會影響細胞的分離和回收。

4.　離心：一般采用離心力為400g，時間20～25min。由于多層Percoll之間密度差別不大，因此離心機加速、降速時要慢，要平穩(wěn)。

5.　取樣：當所要分離的細胞絕大部分在兩層的界面時，可逐層去除Percoll液后收集界面部位的細胞;有時大部分細胞位于Percoll層中,則需要逐層收集。收獲含有Percoll液的細胞經(jīng)2次洗滌后可供培養(yǎng)或檢測用。

Percoll 細胞分離液