首先要注意避免出現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標記酶的ELISA測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色。血清標本如是以無菌操作分離，則可以在2～8 ℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時間保存，應在-70 ℃以下。樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染，一則細菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產生分解作用；二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產生非特異性干擾。標本在保存中如出現細菌污染所致的混濁或絮狀物時，應離心沉淀后取上清檢測。冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用，從而引起假陰性結果。此外，凍融標本的混勻亦應注意，不要進行劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可。
在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結合物，加底物。凍結血清融解后，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上強烈振蕩。制備血漿標本需借助于抗凝劑，而血清標本只要待血清天然凝固、血塊收縮后即可取得。也可在板孔中加入稀釋液，再在其加入血清標本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。一般說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體液(如血清 )、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體 或抗原成份，ELISA試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保留。
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