Eca-109/VCR細胞

1.試劑和溶液

乙醇: 無水乙醇，95%乙醇，85%乙醇，70%乙醇

抗原修復液: 0.01M的檸檬酸鈉緩沖液：58.82g檸檬酸三鈉及7.56g檸檬酸溶于200ml純水，調(diào)pH至 6.0，純水1:100稀釋為工作液

3%過氧化氫-甲醇: 30%的過氧化氫與無水甲醇1:9稀釋

10X PBS: 80g NaCl，2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和2.4g KH2PO4 加1 L純水，調(diào)pH至 7.4

洗滌液: 1×PBS：純水稀釋10× PBS；1× PBST：含0.05% Tween-20 的1×PBS（1×PBST）super block，生物素標記的UltraTekAnti-Polyvalent二抗，酶標親和素UltraTek HRP，DAB

顯色試劑盒：Cat. KT1002a

抗體稀釋液：3%BSA-PBS

0.5%鹽酸-乙醇：0.5～1%鹽酸，95.0～95.5%乙醇

蘇木素：蘇木精2g溶于250ml無水乙醇，十六水合硫酸鋁17.6g 溶與750ml純水，以上溶液充分混合，加入碘酸鈉 0.2g和冰醋酸20ml

2.實驗步驟

1組織固定：烘箱溫度65-75℃ 30min或者65℃隔夜；

2脫蠟：二甲苯浸泡三次，每次10分鐘；

3水化：依次經(jīng)過無水乙醇，95%乙醇，85%乙醇，70%乙醇浸泡，每次5min；

4洗滌：自來水沖洗1次，PBS浸泡3min；

5抗原修復：放入稀釋100倍的檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0) 中，高壓鍋煮沸10min，常溫冷卻30min；

6洗滌：純水浸泡2次，PBS浸泡1次，每次3min；

7滅活酶：室溫下3%過氧化氫-甲醇暗處處理切片15min；

8洗滌：純水浸泡1次，PBS浸泡2次，每次3min；

9封閉：加入適當體積的super block（KT1002a Reagent A），37℃溫箱孵育5min；

10洗滌：純水浸泡1次，PBS浸泡2次，每次3min；

11一抗：加入反應體積為0.15ml，適合濃度的一抗, 37℃ 濕盒孵育60min。

12洗滌：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次，每次3min；

13加入適當體積生物素標記的UltraTek Anti-Polyvalent的二抗（KT1002a Reagent B），37℃濕盒孵育10min；

14洗滌：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次，每次3min；

15加入適當體積酶標親和素UltraTek HRP（KT1002a Reagent C）, 37℃濕盒孵育10min；

16洗滌：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次，每次3min；

17顯色：滴加適量DAB顯色液(KT1003a)至切片上，室溫顯色1~5min，自來水沖洗；

18復染：蘇木素染色5min，蒸餾水沖洗5min；

19分化： 0.5%鹽酸乙醇混合液中分化，自來水沖洗3-4次， PBS中浸泡10-20秒返藍，自來水沖洗2次。

20脫水：經(jīng)過70%乙醇，85%乙醇，95%乙醇，無水乙醇浸泡，每次5min；

21透明：二甲苯浸泡2次，每次10-15min；

22封片：晾干后加中性樹膠，蓋玻片封片；

23結(jié)果：顯微鏡觀察，記錄結(jié)果。

購買放心細胞株細胞系，耐藥濃度倍數(shù)高穩(wěn)定耐藥株，選擇慧穎生物

慧穎生物提供腫瘤耐藥細胞株的建立與服務。慧穎生物可以根據(jù)客戶要求構(gòu)建相應的細胞系。腫瘤耐藥株的建立和應用，能夠給予臨床zui直接的指導。

服務內(nèi)容 價格 服務周期

藥物濃度梯度遞增法建立耐藥細胞株 詢價6個月

大劑量間歇誘導法建立耐藥細胞株 詢價6個月

主要提供一下耐藥細胞株的建立：

人乳腺癌阿霉素耐藥細胞株

人乳腺癌紫杉醇耐藥株

人肺腺癌紫杉醇耐藥株

人肝癌氟尿嘧啶耐藥株

人結(jié)腸癌長春新堿耐藥株

人口腔上皮癌長春新堿耐藥株

人結(jié)腸癌紫杉醇耐藥株

人結(jié)腸癌氟尿嘧啶耐藥株

人卵巢癌順鉑耐藥株

人白血病阿霉素耐藥株

人卵巢癌紫杉醇耐藥株

人胃癌順鉑耐藥株

人白血病阿霉素耐藥株

人乳腺癌阿霉素耐藥細胞株

人結(jié)腸癌長春新堿耐藥株

人肝癌氟尿嘧啶耐藥株

人乳腺癌抗雌激素耐藥株

人乳腺癌Tamoxifen耐藥株

小鼠激素依賴性乳腺癌細胞

服務周期

1. 有現(xiàn)成的細胞系：6個月，具體時間根據(jù)客戶的要求以及樣本數(shù)而定；

2. 沒有已建成的細胞系，需要構(gòu)建，公司構(gòu)建時間約為15個月左右。

公司熱賣耐藥株：K562/Adr細胞，BIU-87/Adr細胞，A549/DDP細胞，NCI-H446/VP細胞，A549/Taxol細胞，A549/DDP細胞，H1975/培美曲塞細胞，BEL-7402/FU細胞，HCT-8/VCR細胞，HCT-8/FU細胞，HCT-8/Taxol細胞，A2780/Taxol細胞，A2780/DDP細胞，MCF-7/Adr細胞，Eca-109/VCR細胞，SGC-7901/DDP細胞，PATU-8988/FU細胞，PATU-8988/FU細胞，HCT116/L-OHP細胞，LOVO/ADR細胞，SGC7901/DDP細胞，SGC7901/VCR細胞，L1210/DDP細胞，H446/VP細胞，COC1/DDP細胞，HepG2/ADR細胞等。