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MHCC-97H MHCC-97H細胞 細胞株培養

發布時間:2016-04-01瀏覽:2404次

標題名稱:MHCC-97H  MHCC-97H細胞 細胞株培養

細胞名稱

 MHCC-97H人高轉移肝癌細胞

種屬

組織來源

生長狀態

貼壁生長

細胞形態

上皮樣

培養條件

培養基類型:DMEM(Hyclone SH30243.01)培養基

FBS(德國SERANAS-FBS-SA-015): 10%

抗生素:雙抗

培養條件:37℃,CO2: 5%

傳代方法

收到細胞后,在倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀態:

如果沒長滿,將培養瓶用75%酒精消毒后在超凈臺內更換新鮮培養液,繼續培養。

如果細胞已經長滿(約80%-90%)則傳代后繼續培養。

貼壁細胞傳代方法:

1 棄去培養基,用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。

2 加1ml 0.25%的胰酶(含0.02%EDTA),讓胰酶與大部分細胞接觸后放入37℃培養箱內,隨時觀察細胞狀態變化,待細胞大部分變圓后加*培養基終止消化。

懸浮細胞傳代方法:可以直接傳代也可以離心法傳代。

1 直接傳代是讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3,吹打細胞形成細胞懸液后,分別接種到其他培養皿或培養瓶中繼續培養。

2離心法傳代是將細胞連同培養液一并轉移到離心管內, 1000rpm,5分鐘,去除上清,加新的培養液到離心管內,吹打細胞形成細胞懸液后,分別接種到其他培養皿或培養瓶中繼續培養。

 一般沒有特殊說明,細胞一般是一傳二。

凍存方法

70% *培養基,20%FBS,10%DMSO,現用現配。

儲存:液氮中長期保存。

1 觀察細胞在低倍鏡下觀察,便于整體估計細胞密度。

2 在運輸過程中可能會導致一些貼壁不牢的細胞發生部分脫落,可離心吹打后重新種入瓶中培養。

3 收到細胞后若發現培養瓶破損、細胞污染等,請拍照并在三天內與我們。

注意:我公司所用德國SERANAS-FBS-SA-015南美血清,細胞長勢很好,凡購買我公司MHCC-97H,我公司贈送20-50ML試用裝一瓶。

當您收到正確產品時,需要計數細胞以確定其數量和活性。

這一步驟非常重要,能確定您收到的產品是否合格

1. 在生物安全柜(超凈工作臺)中,將細胞混勻。細胞在1.5ml和2ml試管中的,請選用1000μl的槍頭混勻;在5ml,15ml或50ml的試管中的,請選用5ml的移液管混勻。

2. 從試管中取10μl細胞樣品,和10μl胎盤蘭混勻后;加入細胞計數板中,進行細胞計數。

選取正確的稀釋倍數,對正確計算細胞數量和細胞活性是非常重要的

試管規格

細胞量

細胞取樣

0.4%臺盤蘭

PBS(1×)

稀釋倍數

1.5ml

0.5-1×106

10μl

10μl

-

2

2ml

0.5-1×106

10μl

10μl

-

2

5ml

5×106

10μl

10μl

-

2

15ml

10×106

10μl

10μl

-

2

15ml

15-20×106

10μl

10μl

80μl

10

50ml

30-100×106

10μl

10μl

80μl

10

N = 細胞計數板上四個大格的細胞量

D = 稀釋倍數

細胞數量和活性計算公式:

細胞數量 = N/4×D×_ml = _ × 104

細胞活性 = 沒有染上臺盼蘭的細胞/全部的細胞×100%

如果你計數的細胞明顯少于我們聲稱的細胞數,請按以下步驟操作:

(1) 檢查細胞懸液中是不是有細胞團。

如果有的話,請用1000μl的槍頭輕輕吹打混勻后,再次取樣計數。

(2) *的細胞濃度是在計數板中的每個大格里有50-100個細胞(總數200-400)。

如果不是,請做適當的濃度稀釋后,再計數一次。

(3) 請立即與我們。

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