標(biāo)簽抗體

標(biāo)簽抗體

簡(jiǎn)介

標(biāo)簽抗體，別名為抗原表位，又稱(chēng)抗原決定簇，是抗原分子中決定抗原特異性的特殊區(qū)域或基團(tuán)，是與抗體特異性結(jié)合的結(jié)構(gòu)或序列。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，科研人員可以通過(guò)DNA重組技術(shù)，構(gòu)建包含目的基因以及表位標(biāo)記的融合蛋白，進(jìn)而通過(guò)特異性標(biāo)簽抗體對(duì)其鑒定與純化，以達(dá)到研究的需求。

主要類(lèi)別

Flag抗體-抗Flag

　　融合標(biāo)簽，如Flag、GST等標(biāo)簽的使用可以簡(jiǎn)化蛋白質(zhì)的純化過(guò)程、控制蛋白質(zhì)固定的空間取向及方便檢測(cè)、使體內(nèi)生物事件可視化、提高重組蛋白質(zhì)的產(chǎn)量、增強(qiáng)重組蛋白質(zhì)的可溶性和穩(wěn)定性等。常用的標(biāo)簽包括myc、HA、Flag、His、GST等。其中Flag標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個(gè)短的親水性八氨基酸肽（DYKDDDDK）融合到目標(biāo)蛋白。 　　Flag標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞類(lèi)型，包括細(xì)菌、酵母和哺乳動(dòng)物細(xì)胞等，相應(yīng)的Flag也被廣泛應(yīng)用。由于Flag標(biāo)簽系統(tǒng)的純化條件是非變性的，因此可以純化所有有活性的融合蛋白。Flag標(biāo)簽可以通過(guò)加入腸激酶處理去除，腸激酶專(zhuān)一識(shí)別該肽序列C末端的5個(gè)氨基酸殘基。 　　Flag抗體可以用于檢測(cè)和Flag標(biāo)簽融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測(cè)Flag融合表達(dá)蛋白等。

His抗體-抗His

　　融合標(biāo)簽根據(jù)其相對(duì)分子質(zhì)量大小可以分為兩大類(lèi)：大的蛋白質(zhì)分子和小的多肽片段。融合標(biāo)簽的使用可以簡(jiǎn)化蛋白質(zhì)的純化過(guò)程、控制蛋白質(zhì)固定的空間取向及方便檢測(cè)、使體內(nèi)生物事件可視化、提高重組蛋白質(zhì)的產(chǎn)量、增強(qiáng)重組蛋白質(zhì)的可溶性和穩(wěn)定性等。 　　His標(biāo)簽是由6個(gè)組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽,專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)用于重組蛋白質(zhì)的吸附純化。由于分子量較小，并且較容易分離和純化，His融合標(biāo)簽與其他標(biāo)簽相比有很多明顯優(yōu)勢(shì)，是目前用于純化的融合標(biāo)簽中使用的一種。利用 His標(biāo)簽可以建立一個(gè)基于融合蛋白的檢測(cè)和純化系統(tǒng)。 　　His抗體可以用于檢測(cè)和His標(biāo)簽融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測(cè)His融合表達(dá)蛋白等。

GST抗體-抗GST

　　隨著越來(lái)越多的新基因的發(fā)現(xiàn)，基因融合蛋白表達(dá)體系以其在新發(fā)現(xiàn)蛋白研究中的顯著優(yōu)勢(shì)已得到廣泛應(yīng)用。其中GST標(biāo)簽體系具有蛋白表達(dá)產(chǎn)率高、表達(dá)產(chǎn)物純化方便，以及利于GST抗體制備等特點(diǎn)。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可從細(xì)菌裂解液中提取，在不變性的條件下通過(guò)親和層析得到。GST融合蛋白可被位點(diǎn)特異性蛋白酶裂解，從而除去GST蛋白。融合蛋白又是一個(gè)非常好的強(qiáng)免疫原，因此，很容易制備抗新蛋白的抗體。正是由于以上的優(yōu)點(diǎn)，商品化的GST融合蛋白表達(dá)體系以及GST系統(tǒng)至今仍被廣泛應(yīng)用。 　　近年來(lái)在原核表達(dá)體系中，谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶GST表達(dá)純化系統(tǒng)的應(yīng)用更為普遍。用GST融合表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)外源基因時(shí)，對(duì)融合表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)和純化非常重要，這里面就包括了GST的應(yīng)用。

GFP抗體-抗GFP

　　常用的標(biāo)簽包括GFP、HA、Flag、His、GST等。其中綠色螢光蛋白（Green Fluorescent Protein），簡(jiǎn)稱(chēng)GFP，這種蛋白質(zhì)zui早是由下村脩等人在1962年在一種學(xué)名Aequorea victoria的水母中發(fā)現(xiàn)。其基因所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，在藍(lán)色波長(zhǎng)范圍的光線激發(fā)下，會(huì)發(fā)出綠色螢光。 　　GFP或其突變體EGFP等被廣泛用于基因表達(dá)效率的檢測(cè)，以及和目的蛋白融合表達(dá)用于檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)和分布。一般來(lái)說(shuō)，GFP抗體不僅可以檢測(cè)GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w，也可以檢測(cè)和GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測(cè)GFP融合表達(dá)蛋白等。 　　GFP標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞類(lèi)型，包括細(xì)菌、酵母和哺乳動(dòng)物細(xì)胞等，相應(yīng)的GFP也被廣泛應(yīng)用。

Myc抗體-抗Myc

　　隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的迅猛發(fā)展，重組蛋白質(zhì)的使用在近年來(lái)大大增加。重組雜合體含有一個(gè)親和標(biāo)簽如GST、Myc、His等，可用于輔助目標(biāo)蛋白的純化，這已經(jīng)被廣泛使用。利用融合蛋白有助于重組蛋白純化和檢測(cè)的這個(gè)有點(diǎn)被廣泛認(rèn)可。在1985年開(kāi)發(fā)出鼠抗c-myc并被作為免疫化學(xué)試劑用于細(xì)胞生物學(xué)和蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域中。Myc標(biāo)簽（序列為：EQKLISEEDL）已成功應(yīng)用于WB雜交技術(shù)、免疫沉淀IP和流式細(xì)胞術(shù)中。因此可用于檢測(cè)重組蛋白在細(xì)菌、酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞和哺乳細(xì)胞中的表達(dá)情況。 Myc標(biāo)簽可放在C端或N端，但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會(huì)降低蛋白質(zhì)的活力，因此Myc標(biāo)簽系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于檢測(cè)但很少用于純化。

HA抗體-抗HA

　　融合標(biāo)簽，如HA、His等標(biāo)簽的使用可以簡(jiǎn)化蛋白質(zhì)的純化過(guò)程、控制蛋白質(zhì)固定的空間取向及方便檢測(cè)、使體內(nèi)生物事件可視化、提高重組蛋白質(zhì)的產(chǎn)量、增強(qiáng)重組蛋白質(zhì)的可溶性和穩(wěn)定性等。常用的標(biāo)簽包括myc、HA、Flag、His、GST等。其中HA標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個(gè)HA (influenza hemagglutinin epitope: YPYDVPDYA)短肽肽融合到目標(biāo)蛋白。 　　HA標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于多種細(xì)胞類(lèi)型，相應(yīng)的HA也被廣泛應(yīng)用。HA能特異識(shí)別C末端或N末端帶有HA標(biāo)簽(HA-tagged)的融合蛋白。