elisa法的實驗原理

　　采用ELISA法，血清加到包被純化的肺炎衣原體抗原的微滴孔中，使之發(fā)生反應(yīng)，然后去除未結(jié)合的抗體，加入結(jié)合有HRP的抗人Ig抗體使之與已結(jié)合的抗體反應(yīng)，結(jié)合的HRP與發(fā)色底物發(fā)生顏色反應(yīng)。zui后，終止底物反應(yīng)，在酶標(biāo)儀上讀出光密度值。

　　[標(biāo)本準(zhǔn)備]

　　取新鮮末梢血或靜脈血。如采血后24h內(nèi)不能進(jìn)行試驗，分離血清后將其保存于一20℃環(huán)境中。檢測時，使樣本恢復(fù)至室溫。

　　[試劑]

　　1.預(yù)包被微孔板

　　2.陽性對照

　　3.弱陽性對照

　　4.陰性對照

　　5.標(biāo)本稀釋液

　　6.濃縮酶聯(lián)物

　　7.底物A、B

　　8.終止液

　　[儀器]

　　酶標(biāo)儀或全自動酶聯(lián)免疫檢測儀。

　　[操作步驟]

　　1.本實驗結(jié)果須結(jié)合臨床表現(xiàn)、病史作出診斷后，方可采取適當(dāng)臨床處理。

　　2.試劑盒雖然含有消除干擾因子的物質(zhì)，但仍可能有少量標(biāo)本難以除盡干擾。因此，如某標(biāo)本多項IgM均為陽性，應(yīng)考慮RF的干擾。

　　3.將稀釋標(biāo)本置37℃環(huán)境中20min。

　　4.各加100ul陽性、弱陽性、陰性對照及已稀釋待測標(biāo)本上清液于相應(yīng)孔中，空白對照孔加100u1標(biāo)本稀釋液，蓋好反應(yīng)板，置37℃環(huán)境中30min。

　　5.甩盡板中液體，每孔用200～300ul洗滌液洗5次，每次均需拍干。

　　6.每孔加酶聯(lián)物100~1，蓋好反應(yīng)板，置37℃環(huán)境中30min。

　　7.甩盡板中液體，洗5次，每次拍干。

　　8.加底物A、B各1滴或各50tzl，混勻，置37℃環(huán)境中15min。

　　9.取出，加終止液1滴，用酶標(biāo)儀450nm測其OD值。若肉眼觀察則不加終止液，直接判斷結(jié)果。

　　[注意事項]

　　1.配制洗滌液 l瓶濃縮洗滌液加475ml蒸餾水。配好的洗滌液短期內(nèi)可置室溫環(huán)境中，長期可存于2—8℃環(huán)境中。

　　2.配制酶聯(lián)物 按1：101倍稀釋，即取1u1濃縮酶聯(lián)物加酶聯(lián)物稀釋液1 000ul（根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定稀釋量），未用完的丟棄。

　　3.待試劑盒平衡至室溫后，待測標(biāo)本按1;51稀釋，即取4tA血清與200u1標(biāo)本稀釋液混合。