elisa法的實驗原理

　　采用ELISA法，血清加到包被純化的肺炎衣原體抗原的微滴孔中，使之發生反應，然后去除未結合的抗體，加入結合有HRP的抗人Ig抗體使之與已結合的抗體反應，結合的HRP與發色底物發生顏色反應。zui后，終止底物反應，在酶標儀上讀出光密度值。

　　[標本準備]

　　取新鮮末梢血或靜脈血。如采血后24h內不能進行試驗，分離血清后將其保存于一20℃環境中。檢測時，使樣本恢復至室溫。

　　[試劑]

　　1.預包被微孔板

　　2.陽性對照

　　3.弱陽性對照

　　4.陰性對照

　　5.標本稀釋液

　　6.濃縮酶聯物

　　7.底物A、B

　　8.終止液

　　[儀器]

　　酶標儀或全自動酶聯免疫檢測儀。

　　[操作步驟]

　　1.本實驗結果須結合臨床表現、病史作出診斷后，方可采取適當臨床處理。

　　2.試劑盒雖然含有消除干擾因子的物質，但仍可能有少量標本難以除盡干擾。因此，如某標本多項IgM均為陽性，應考慮RF的干擾。

　　3.將稀釋標本置37℃環境中20min。

　　4.各加100ul陽性、弱陽性、陰性對照及已稀釋待測標本上清液于相應孔中，空白對照孔加100u1標本稀釋液，蓋好反應板，置37℃環境中30min。

　　5.甩盡板中液體，每孔用200～300ul洗滌液洗5次，每次均需拍干。

　　6.每孔加酶聯物100~1，蓋好反應板，置37℃環境中30min。

　　7.甩盡板中液體，洗5次，每次拍干。

　　8.加底物A、B各1滴或各50tzl，混勻，置37℃環境中15min。

　　9.取出，加終止液1滴，用酶標儀450nm測其OD值。若肉眼觀察則不加終止液，直接判斷結果。

　　[注意事項]

　　1.配制洗滌液 l瓶濃縮洗滌液加475ml蒸餾水。配好的洗滌液短期內可置室溫環境中，長期可存于2—8℃環境中。

　　2.配制酶聯物 按1：101倍稀釋，即取1u1濃縮酶聯物加酶聯物稀釋液1 000ul（根據檢測標本數量確定稀釋量），未用完的丟棄。

　　3.待試劑盒平衡至室溫后，待測標本按1;51稀釋，即取4tA血清與200u1標本稀釋液混合。