雞白介素ELISA試劑盒檢測原理等信息介紹

      【雞白介素3（IL-3）ELISA試劑盒需要而未提供的試劑和器材白介素ELISA試劑盒】
       1、37℃恒溫箱ELISA試劑盒
       2、標準規格酶標儀
       3、精密移液器ELISA試劑盒價格及一次性吸頭
       4、蒸餾水
       5、一次性試管
        6、吸水紙  上海ELISA試劑盒
      【雞白介素3（IL-3）ELISA試劑盒操作步驟】
       1、準備禽ELISA試劑盒：從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。
       2、配液：豬ELISA試劑盒用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
       3、加標準品和待測樣本：取足夠數量的酶標包被板,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。
        4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
        5、洗板：棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
        6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。
        7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
        8、洗板：棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
        9、顯色：每孔先加入顯色劑A液50μL,再加入顯色劑B液50μL,平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s）,37℃避光顯色15min。
       10、終止：取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應（顏色由藍色立轉黃色）。
       11、測定：以空白孔調零,在終止后15分鐘內,用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
       12、計算：根據標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。
      【雞白介素3（IL-3）ELISA試劑盒樣本要求】
       1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3）,因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
       2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
       3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒。
      【雞白介素3（IL-3）ELISA試劑盒注意事項】
       1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
       2、酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
       3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。
       4、牢記樣本已經稀釋5倍,計算結果乘以5才是樣本實際濃度。
       5、本試劑盒定量范圍為6.25-200ng/L,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果（6.25-200ng/L范圍內）,乘以總稀釋倍數即為樣本zui終濃度。
        6、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。
        7、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔；不得重復使用封板膜。
       8、試劑盒保質期內使用,不同批號的試劑不得混用。
       9、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

       本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）。將標準品、待測樣本加入到預先包被雞白介素3（IL-3）單克隆抗體透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,豬ELISA試劑盒洗滌除去ELISA試劑盒價格未結合的成分,白介素ELISA試劑盒再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,ELISA試劑盒洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B,底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉化為藍色產物,禽ELISA試劑盒在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中雞白介素3（IL-3）濃度呈正相關,450nm波長下測定OD值,根據標準品和樣品的OD值,計算樣本中雞白介素3（IL-3）含量。 上海ELISA試劑盒