菌種的傳代和培養(yǎng)、檢查和復(fù)壯、管理

一、傳代和培養(yǎng)

    工作菌種的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制，不得超過5代，（從菌種保藏中心獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代）防止過度的傳代造成菌種變異。

    1代是指將活的培養(yǎng)物接種到新鮮培養(yǎng)基中，任何亞培養(yǎng)的形式均被認(rèn)為是轉(zhuǎn)種或傳代一次。必要時，實驗室應(yīng)對工作菌株的特性和純度進行確認(rèn)。

細(xì)菌的接種、分離和培養(yǎng)

    常用培養(yǎng)基種類：斜面培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、平板培養(yǎng)基。

    接種方法：涂布法、劃線法、穿刺法、直接加入法等

    分離：為了獲得純菌種（株），采用的將細(xì)菌分離成單個細(xì)胞，使其獨立分裂繁殖形成單個菌落的操作技術(shù)。

    分離一般采用平板培養(yǎng)基。

    分離方法主要有分段劃線法、連續(xù)劃線法、涂布分離法、傾注分離法等。

    培養(yǎng) ：接種后的培養(yǎng)基，根據(jù)不同微生物生長條件的要求，將培養(yǎng)基放在適宜微生物生長的環(huán)境中（溫度、濕度、氧氣等），使其生長繁殖的過程。需氣菌培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法。

    培養(yǎng)后微生物的生長判斷

    固體培養(yǎng)基

    液體培養(yǎng)基 

二、菌種的檢查與復(fù)壯 

   菌種的衰退

   菌種經(jīng)過長期人工傳代培養(yǎng)或保藏，由自發(fā)突變的作用而引起某些優(yōu)良特性變?nèi)趸蛳У默F(xiàn)象。

   控制菌種的衰退方法 

⑴控制傳代次數(shù) 盡量避免不必要的接種和傳代，降低突變幾率。采用良好的傳代保藏方法。《中國藥典》2010年版規(guī)定，傳代次數(shù)不得超過5代。

⑵創(chuàng)造適宜的培養(yǎng)條件

⑶用不同類型的細(xì)胞進行傳代

⑷采用有效的保藏方法

  定期檢查    

  主要檢查項目：菌落形態(tài)、革蘭染色、顯微鏡下菌體形態(tài)、生化特性及血清學(xué)檢查。 

  菌種的復(fù)壯： 使衰退的菌種重新恢復(fù)原來的優(yōu)良特性的 過程驗室主要采用分離純化的方法。

三、菌種的管理

1、使用菌種的單位，應(yīng)具備從事微生物工作的條件和設(shè)備。  菌種應(yīng)由專人負(fù)責(zé)管理，管理人員應(yīng)具有微生物專業(yè)知識和技術(shù)水平，并應(yīng)具有較強的責(zé)任心。

2、實驗室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度；

包括：每支菌種標(biāo)注名稱、標(biāo)準(zhǔn)號、接種日期、傳代次數(shù)、進出、收集、貯藏、保存、確認(rèn)試驗以及銷毀的記錄、標(biāo)準(zhǔn)菌種的申購記錄、從標(biāo)準(zhǔn)菌株到工作菌株操作記錄，如菌種定期轉(zhuǎn)種傳代，鑒定（純度、特性）、培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件、菌種保存的位置和條件及其它需要的程序。

3 、菌種應(yīng)冷藏或冷凍保存，保存菌種的冰箱不得放置食品和易揮發(fā)性藥品，放置菌種應(yīng)有的冰箱，應(yīng)上鎖管理。

4、由專人按操作規(guī)程和有關(guān)要求定期進行傳代，并定期對保存的菌種進行檢查，一般每年1～2次，（或定期更換凍干菌種）。發(fā)現(xiàn)菌種的異常情況應(yīng)及時檢查。一旦發(fā)現(xiàn)菌種污染和變異現(xiàn)象，應(yīng)立即報告、研究處理。尤其長期保存時。

5、詳細(xì)記錄

   菌種的來源、接收、傳代、分離、復(fù)壯、使用和鑒定等均應(yīng)做好詳細(xì)記錄。包括菌保存位置、環(huán)境（溫度）、種傳代或使用時間、名稱、菌號、代數(shù)、傳代或保存形式、分離、復(fù)壯方式、使用內(nèi)容、鑒定情況等都應(yīng)進行詳細(xì)的記錄。

   菌種不得隨意帶出實驗室，外單位索取、購買應(yīng)有證明和登記，并包裝嚴(yán)密。

   菌種處理應(yīng)嚴(yán)格按操作規(guī)程進行，滅菌處理應(yīng)有詳細(xì)記錄。

菌懸液的制備與保存：參照《中國藥典》2010版培養(yǎng)基適用性試驗。

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