新手必看人白介素12試劑盒操作方法

人白介素12試劑盒ELISA試劑盒操作方法：

1.   使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

2.   根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

3.   加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。

4.   甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

5.   每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6.   甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

7.   每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。

8.   取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

9.   在450nm波長處測定各孔的OD值。

人白介素12試劑盒ELISA試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白介素12（IL-12）水平。用純化的人白介素12（IL-12）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白介素12（IL-12），再與HRP標記的白介素12（IL-12）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素12（IL-12）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），ELISA試劑盒通過標準曲線計算樣品中人白介素12（IL-12）濃度。