小鼠正常乳腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)方法

小鼠正常乳腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)方法

產(chǎn)品名稱：小鼠正常乳腺上皮細(xì)胞

培養(yǎng)條件：1640培養(yǎng)基+10% FBS

2天換液一次，1:2傳代  3-4天傳代一次

產(chǎn)品供應(yīng)商：上海慧穎生物科技有限公司

1、收到細(xì)胞，請查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快。

2、收到細(xì)胞，如包裝完好，請在顯微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過程中的問題，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時，請不要打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，先不要把培養(yǎng)基吸出來。應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時左右，讓細(xì)胞先穩(wěn)定下，再于顯微鏡下觀察，此時多數(shù)細(xì)胞會重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁，請用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，如臺盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請按懸浮細(xì)胞的方法處理

3. 收到細(xì)胞時如無異常情況 ，請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時，用75%酒精（建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水。噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作：然后打開蓋子，先用槍頭把培養(yǎng)基吸出10ML左右，放在離心管里，然后瓶口過火，（嚴(yán)禁直接傾倒），這樣可以保證不污染，再用10ML的移液管，將剩余的培養(yǎng)基全部吸出，放于離心管中，培養(yǎng)瓶中只剩余5-10ML左右培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)就可以了）：超過80%匯合度時，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。

如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3-5分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。

4，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里，存放于4℃冰箱，以備不時之需。第二天換液時，要配制新鮮的培養(yǎng)基和進(jìn)口胎牛血清。這樣對細(xì)胞生長更好。不要再用我們原瓶的培養(yǎng)基了。

5 、24小時后，細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁，就可以傳代了。（貼壁細(xì)胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細(xì)胞生長面為準(zhǔn)）PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml  0.25%含EDTA的胰酶消化，消化時間以具體細(xì)胞為準(zhǔn)，一般1-3分鐘，不超過5分鐘。可以放入37℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動瓶壁，見細(xì)胞脫落下來，加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之*脫落，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心，1000rpm/5min。棄上清，視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù)，一般一傳二，如細(xì)胞量多可一傳三，有些細(xì)胞不易傳得過稀，有些生長較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶，以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。（懸浮細(xì)胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。

6，貼壁細(xì)胞 ，懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無菌操作。換液時，換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液和進(jìn)口胎牛血清，37度    5%CO2 培養(yǎng)

7.  收到細(xì)胞后，請鏡下觀察細(xì)胞，用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多，請離心收集細(xì)胞，接種到一個新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，使用進(jìn)口胎牛血清. 剛接到細(xì)胞，若細(xì)胞不多時 血清濃度可以加到15％去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右 ，血清濃度還是在10％。

                                                      細(xì)胞培養(yǎng)條件

1，1640培養(yǎng)基（GIBCO,貨號11875093） +10%進(jìn)口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+2mM  L-G(L-谷氨酰胺)+1mM  Sodium pyruvate+10mM   HEPES(gibco.。貨號。15630-080)

2,DMEM高糖培養(yǎng)基（GIBCO,貨號11995065）+10%進(jìn)口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+4mM  L-G(L-谷氨酸胺)+1mM （丙酮酸鈉1,HEPES(gibco.。貨號。15630-080)

3,E,MEM培養(yǎng)基（GIBCO,貨號11095080）+10%進(jìn)口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+NEAA(非必需氨基酸)+2mM  L-G(L-谷氨酸胺)+1mM （丙酮酸鈉）

4，F(xiàn)12K培養(yǎng)基 （GIBCO,貨號11765054）+10%進(jìn)口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+2mM  L-G(L-谷氨酸胺)

5，McCoy's 培養(yǎng)基（GIBCO,貨號16600082）+10%進(jìn)口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+1.5mM  L-G(L-谷氨酸胺)

6 . L 15培養(yǎng)基（Hyclone,貨號SH30525.01）+10%進(jìn)口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+1.5mM  L-G(L-谷氨酸胺)

1. DMEM/F12培養(yǎng)基（GIBCO,貨號11330032）+10%進(jìn)口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+1.5mM  L-G(L-谷氨酸胺)

8. IMDM培養(yǎng)基（GIBCO,貨號C12440500BT）+10%進(jìn)口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+1.5mM  L-G(L-谷氨酸胺)

2, L-G(L-谷氨酸胺)。L-Glutamine 200mM  (GIBCO。貨號25030-081)

3,NEAA(非必需氨基酸).(GIBCO。貨號11140-050)

4..sodium.pyruvate  (GIBCO。貨號11360-070)   

100ML 1640*培養(yǎng)基配法
1640培養(yǎng)基   86ML  

 FBS 血清        10ML       

 L-谷氨酸胺。100X  1ML
丙酮酸鈉  100X        1ML

HEPES(1M) 10mM  1ML   

抗菌素（青、鏈霉素） 1ML